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人胚腎細胞293T的處理要注意以下幾點
人胚腎細胞293T的處理要注意以下幾點
更新時間:2022-07-06 | 點擊率:1974
人胚腎細胞;293,上皮狀,早期報道中指出該細胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA,但是明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過對Ad5的插入點的克隆測序發(fā)現(xiàn),Ad5的1~4344位線性核苷酸整合入細胞染色體19q13.2。該細胞為人類腺病毒載體擴增的宿主??杀磉_異常的玻連蛋白的細胞表面受體,由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。生物安全級別為2級。
人胚腎細胞293T
的處理要注意以下幾點:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.收到細胞后初次傳代推薦將細胞懸液按1:2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,建議凍存一支備用,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:5的比例進行。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。
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