人膀胱癌細胞的培養(yǎng)通常遵循以下步驟和條件：
 

　　一、培養(yǎng)條件
 

　　培養(yǎng)基：常用RPMI-1640或DMEM等培養(yǎng)基，并添加10%的胎牛血清(FBS)和1%的雙抗(青霉素/鏈霉素)以提供必要的營養(yǎng)和防止污染。
 

　　培養(yǎng)環(huán)境：細胞需在37℃、5% CO2及飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
 

　　二、培養(yǎng)步驟
 

　　復蘇：
 

　　將凍存的細胞從液氮中取出，迅速置于37℃水浴中搖晃解凍。
 

　　解凍后，將細胞懸液轉(zhuǎn)移至含有適量培養(yǎng)基的離心管中，以1000rpm離心5分鐘，棄去上清液。
 

　　用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞，接種至培養(yǎng)瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。
 

　　第二天換液并檢查細胞密度。
 

　　傳代：
 

　　當細胞密度達到80%~90%時，即可進行傳代。
 

　　棄去舊培養(yǎng)基，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1~2次。
 

　　加入適量的胰蛋白酶消化液(如0.25% Trypsin-0.53mM EDTA)，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1~2分鐘。
 

　　在顯微鏡下觀察細胞消化情況，待細胞大部分變圓并脫落后，加入培養(yǎng)基終止消化。
 

　　輕輕吹打細胞，使其脫落，并轉(zhuǎn)移至離心管中，以1000rpm離心5分鐘，棄去上清液。
 

　　用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞，按1:2到1:5的比例分到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，補足培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
 

　　凍存：
 

　　待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行凍存。
 

　　棄去舊培養(yǎng)基，用PBS潤洗細胞后，加入胰蛋白酶消化液消化細胞。
 

　　消化完成后，加入培養(yǎng)基終止消化，并輕輕吹打細胞使其脫落。
 

　　將細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，以1000rpm離心5分鐘，棄去上清液。
 

　　用凍存液(如90%FBS+10%DMSO)重懸細胞，并調(diào)整細胞密度至適宜范圍。
 

　　將細胞懸液分裝至凍存管中，每管1ml左右，并標注好細胞名稱、代數(shù)、日期等信息。
 

　　將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80℃冰箱過夜，然后轉(zhuǎn)入液氮中長期保存。
 

　　三、注意事項
 

　　無菌操作：整個培養(yǎng)過程中需嚴格遵循無菌操作原則，防止細胞污染。
 

　　消化時間：消化時間需根據(jù)細胞類型和胰蛋白酶活性進行調(diào)整，避免消化過度導致細胞損傷。
 

　　換液周期：一般每2~3天換一次液，以保持培養(yǎng)基的新鮮和營養(yǎng)充足。
 

　　細胞狀態(tài)觀察：定期觀察細胞生長狀態(tài)，包括細胞形態(tài)、密度、生長速度等，以便及時調(diào)整培養(yǎng)條件。